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Human Aquaporin 2 Elisa Kit

소개
Aquaporin 2 (AQP2)는 약 300 개의 아미노산으로 구성된 비교적 작은 막 단백질이며 신장 수집 덕트에서 소변 농도에 관여하며, 물 분자가 통과 할 수 있으며 신체의 물의 양을 제어 할 책임이 있습니다. 신체가 탈수되면, 바소프레신은 AQP2가 세포 내에서 세포 표면으로 이동하여 원래 소변에서 물만 재 흡수하고 소변을 집중시킨다. AQP2 유전자 이상이 발생하면 신장 당뇨병이 심한 탈수를 유발할 수있는 것으로 알려져 있습니다.
키트 기능
- 이것은 재조합 인간 아쿠아 포린 2를 사용하여 생산 된 항체를 사용한 효소 면역 분석 (ELISA 방법)입니다.
- 아쿠아 포린 2 (AQP2)는 구체적이고 정확하게 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
- *이 키트는 연구 시약이며 질병을 진단하거나 지원하는 데 사용할 수 없습니다.
키트 구성


- 1필수 장비, 장비 등
- 1빠른 실린더
- 2크기 피펫
- 3마이크로 피펫 및 팁
- 4플레이트 셰이커
- 5플레이트 와셔
- 6인큐베이터
- 7종이 타월
- 8플레이트 리더 (바카라 루쥬 파장 : 450nm)
- 9마이크로 미터 튜브 등 (용량 1.5ml 이상의 밀봉 가능한 용기)
- 2시약 준비 및 저장 방법
- 1청소 솔루션
정제수를 총 세척 용액 (40 mL)의 960 ml의 비율로 혼합하여 준비합니다. 결정이 청소 스톡 용액에 침전 된 경우, 가열 한 후 용해 후 준비하십시오. - 2표준 솔루션
20 μL의 표준 용액 (600 ng/ml)을 380 μl의 1 차 반응 완충제로 20 회 희석하여 30.0 ng/mL 표준 용액을 형성합니다. 30.0ng/mL 표준 용액을 일련의 희석하여 15.0ng/ml, 7.50ng/ml, 1.88ng/ml, 0.94ng/ml 및 0.47ng/ml의 농도로 표준 용액을 준비하십시오. 0NG/mL 표준 솔루션은 1 차 반응 완충제입니다. 표 1은 표준 용액에 대한 희석 방법을 보여줍니다.표 1 : 표준 솔루션을 희석하는 방법 - 3안티-인간 아쿠아 포린 2 안티 티어 룸 희석제 (201 배 희석제)
필요한 양을 제조하기 위해 12 mL의 2 차 및 3 차 반응 완충액에서 항-인간 아쿠아 포린 2 항혈청 스톡 용액을 혼합합니다. 두 번째 반응 직전에 준비하십시오. - 4효소-표지 된 항-토끼 IgG 희석제 (201 배 희석)
필요한 양을 제조하기 위해 12 mL의 2 차 및 3 차 반응 완충제에서 효소-표지 된 항-토끼 IgG 스톡 용액을 혼합하십시오. 세 번째 반응 직전에 준비하십시오. - 5기판 솔루션
기판 용액 B를 6 mL의 기판 용액 A에서 혼합하여 필요한 양을 준비합니다. 색상 개발 반응 직전에 준비하고 즉시 사용하십시오.
- *바카라 루쥬을위한 소변 표본을 전처리해야합니다. 전처리 지침은 명령 매뉴얼을 참조하십시오.
- 1청소 솔루션
- 3바카라 루쥬 및 작동 방법
1. 민감도 테스트
0ng/ml의 표준 용액의 흡광도는 0.100 미만입니다.
0.47ng/ml의 표준 용액의 흡광도 0ng/ml의 흡광도는 0.030 이상을 나타냅니다.
30.0ng/ml의 표준 용액의 흡광도 0ng/ml의 흡광도는 1.000 이상을 나타냅니다.
2. 정확도 테스트
세 가지 유형의 제어 된 시편에 대한 바카라 루쥬은 알려진 농도의 ± 30% 이내의 값을 나타냅니다.
3. 동시 재현성 테스트
이중 바카라 루쥬으로 세 가지 유형의 제어 시편이 동시에 4 회 바카라 루쥬되면 바카라 루쥬 된 값의 변동 계수는 20%미만입니다.
4. 바카라 루쥬 범위
우리 시설에서 바카라 루쥬 샘플로 사전 처리 된 소변 표본을 사용한 시험의 결과로, 인간 아쿠아 포린 2의 바카라 루쥬 범위는 0.27-30.0 ng/ml로 설정되었다 (사전 치료 전 소변 표본의 바카라 루쥬 범위는 0.35-39.0 ng/ml, 1.3 번의 상관 없음).
이 키트는 제조 일로부터 18 개월 동안 유효합니다. 만료 날짜는 키트의 외부 상자에 표시됩니다. 2-8 ° C에 보관하십시오. 또한 표준 제품을 -20 ° C 이하의 별도 포장으로 보관하십시오.
4 개의 할부로 사용할 수 있습니다. 나머지 구성 시약을 2-8 ° C에서 밀봉 된 상태에 보관하십시오. 표준 제품을 -20 ° C 이하의 별도 포장으로 보관하십시오. (별도로 사용하는 경우 필요한 플레이트 씰을 잘라 내고 사용하십시오.)
다른 일련 번호를 가진 키트 구성 시약의 조합을 사용하지 마십시오. 일련 번호가 동일하더라도 다른 포장 시약과 항체 플레이트의 조합을 사용하지 마십시오.
사용하기 전에 각 구성 시약을 20-30 ° C로 반환하십시오.
4 가지 유형의 제어 샘플의 농도는 동결 된 표준 제품의 표준 곡선으로부터 계산되었으며, 결과적으로 표준 제품의 동결 및 해동의 최대 7 회 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
우리는 바카라 루쥬 샘플을 플레이트의 우물에 삽입 할 때 발생하는 시간 지연의 영향을 확인했습니다. 동일한 플레이트에서 샘플링에 필요한 시간이 0, 15 및 30 분인 경우 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
모든 세척 작업이 수동으로 수행 된 경우 플레이트 세탁기와 바카라 루쥬이 영향을받지 않았습니다.
- [청소 절차]
- 1플레이트에서 액체를 쫓아 낸 후 종이 타월에 빠르게 분쇄되어 잔류 액체를 완전히 흡수하고 제거합니다.
- 2300 μl의 세척 용액을 각 웰에 넣습니다.
- 3디캔트 및 폐기.
- 4(2)에서 (3)을 두 번 더 반복하십시오.
- 5플레이트에서 액체를 쫓아 낸 후 종이 타월에 빠르게 분쇄되어 잔류 액체를 완전히 흡수하고 제거합니다.
샘플링을위한 표준 절차는 100 μL의 1 차 반응 완충제를 각 웰에 미리 첨가 한 다음 각각의 웰에 각각의 농도에서 50 μL의 표준 용액 및 시편을 추가하는 것입니다. 잘못된 절차를 수행함으로써 먼저 각 웰에 각각의 농도의 표준 용액 및 표본을 먼저 추가 한 다음 각 웰에 100 μL의 1 차 반응 완충제를 추가 한 다음 절차의 효과를 확인한 후 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
우리는 세 가지 유형의 관리 샘플을 사용하여 흔들리는 속도 (Shaking Machine Labinco LD-45)의 효과를 조사했으며 결과적으로 흡광도의 변동은 회전 속도 의존적 방식으로 확인되었습니다. 그러나 아래 다이어그램에서 볼 수 있듯이 거의 동일한 바카라 루쥬 값은 400 ~ 800 rpm 사이에서 얻을 수 있으므로 흔들리는 속도는 400 내지 800 rpm에서 바카라 루쥬 할 수 있습니다. 그러나 다른 모델의 회전 속도가 다를 수 있습니다.

Delfia Plate Shaker : 1296-004 (제조업체 이름 : Perkinelmer)
600 rpm 및 낮음 (약 920 rpm)이 Labinco의 흔들리는 기계 600 rpm과 거의 동일한 바카라 루쥬을 생성 할 수 있음을 확인했습니다. (사내 데이터) Deifia Plate Shaker (1296-004)를 사용할 때 회전 속도를 600 rpm 또는 스케일 낮음 (약 920 rpm)으로 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
마이크로 믹서 쉐이킹 머신 : MX-4 (제조업체 이름 : Sanko Junyaku)를 사용할 때
670 rpm 및 2.5 rpm 회전 스케일 (약 990 rpm)은 Labinco의 흔들리는 기계 600 rpm과 거의 동일한 바카라 루쥬 값을 산출하는 것으로 확인되었습니다. (사내 데이터) 마이크로 믹서 셰이커 (MX-4)를 사용할 때 회전 속도를 670 rpm 또는 스케일 2.5 (약 990 rpm)로 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
반응 온도의 효과는 세 가지 유형의 제어 된 샘플을 사용하여 검사하였고, 흡광도에서의 반응 온도-의존적 변동이 확인되었다. 그러나 바카라 루쥬 값은 대략 20 ° C와 30 ° C 사이에서 얻을 수 있으므로 20 ° C ~ 30 ° C에서 반응해야합니다.
우리는 세 가지 유형의 제어 된 샘플을 사용하여 반응 시간의 효과를 조사했으며, 110 분에서 130 분 사이에 거의 동일한 바카라 루쥬이 얻어졌습니다.
카테랄 반응은 밤새 일 수 있습니다. 하룻밤 사이에 4 ° C에서 17 시간 동안 두십시오.
우리는 3 가지 유형의 관리 샘플을 사용한 항-인간 아쿠아 포린 2 항-비트 항-토끼 IgG 항체의 희석 인자의 효과를 조사하였고, 흡광도에서 희석 인자-의존적 변화가 확인되었지만 거의 동일한 바카라 루쥬은 168-234-fold 희석액 사이에 얻어졌다.
각 농도에서 표준 용액의 흡광도와 표준 용액 0ng/ml의 평균 흡수 (빈 값)를 각각의 실제 흡수를 계산합니다. X 축에 대한 표준 용액의 농도와 Y 축에 대한 상당한 흡수성을 플로팅하십시오. 적절한 회귀 곡선을 각 플롯 (예 : 4 파라미터 로지스틱 회귀 곡선 등)에 채우고 교정 곡선을 만듭니다.
0.27 ~ 30.00 ng/ml에서 인간 아쿠아 포린 2를 바카라 루쥬 할 수 있습니다 (전처리 전 소변 표본의 바카라 루쥬 범위는 0.35 ~ 39.0 ng/ml, 부피 교정의 1.3 배). 우리 시설에서 바카라 루쥬 샘플로서 전처리 된 소변 시편을 사용한 시험 결과는 검출 한계가 0.17ng/ml이고 정량화 한계는 0.27ng/ml임을 보여 주었다.
3 가지 유형의 제어 된 샘플 (H, M, L)을 동시에 4 번 바카라 루쥬했을 때 바카라 루쥬의 날 재현성 테스트가 수행되었고, 상호 바카라 루쥬 된 재현성 테스트는 3 개의 상이한 바카라 루쥬 대상에 의해 수행되었으며, 상호 바카라 루쥬 된 재현성 검사는 아래의 모든 시험의 계수 (CV)와 함께 수행되었다.



각 농도에서 3 가지 유형의 관리 샘플 (H, M, L) 및 동일한 양의 표준 용액이 혼합 된 샘플이 바카라 루쥬되었습니다. 인간 아쿠아 포린 2의 바카라 루쥬을 결정하고 이론적 값에 기초하여 회복 속도를 평가 하였다. 결과적으로, 좋은 결과는 아래와 같이 이론적 값의 ± 25% 내에 얻어졌다.



희석 조정 된 항-인간 아쿠아 포린 2 항혈청을 두 부분으로 나누고, 하나는 냉장되었고, 다른 하나는 25 ° C에서 저장되었고, 4 시간 후에 바카라 루쥬이 수행되었으며, 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
희석 조절 효소-표지 항-토끼 IgG 용액을 두 부분으로 나누고, 하나는 냉장 보관하고, 다른 하나는 25 ℃에서 저장되었고, 6 시간 후에 바카라 루쥬을 수행하고 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
제조 된 기판 용액을 두 부분으로 나누고, 하나는 냉장되었고, 다른 하나는 25 ℃에서 저장되었고, 바카라 루쥬은 3 시간 후에 수행되었으며 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
흡수를 바카라 루쥬 한 후 30 분, 1 시간 및 2 시간 반응 정지 용액을 첨가 한 직후에 흡광도를 바카라 루쥬하였고, 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
바카라 루쥬 가능한 표본은 인간 소변입니다. 소변 검사는 전처리 후 바카라 루쥬에 사용해야합니다. 현재 소변 퇴적물을 제거하지 마십시오. 정착 중에 AQP2가 존재하기 때문에 퇴적물을 고르게 저어주고 퇴적물을 빠르게 수집하십시오.
소변 표본을 운반 할 때 냉장 보관하십시오. -20 ° C 이하에서 냉장 또는 보관하면 5 개의 소변 표본은 최대 9 개월의 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
3 가지 유형의 소변 표본이 얼어서 5 번까지 해동하여 전처리되면 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
사전 치료는 항상 소변 표본을 바카라 루쥬해야합니다.
전처리 정적 시간을 검사 한 후 10 분에서 30 분 이내에 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다. 전처리의 정적 시간은 10 분에서 30 분 안에 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
전처리 된 소변 표본에서 강수량을 샘플링하지 마십시오.
전처리 된 소변 표본이 세 가지 유형의 전처리 된 소변 표본을 사용하여 30 ° C에 저장 한 경우, 24 시간까지 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았으며, 냉장 된 경우 최대 7 일. 전처리 된 소변 표본의 두 가지 유형은 냉장 또는 -20 ° C 이하에 저장 될 때 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
우리는 3 가지 유형의 관리 샘플, 사전 처리 된 소변 표본의 안정성을 조사하고 7 일까지 30 ° C에서 30 ° C에서 냉장 및 보관하여 30 ° C에서 저장할 때 바카라 루쥬 값이 감소하여 8 ° C 또는 아래에 저장하지 않음을 발견했습니다.

밑줄 : 뛰어난
3 가지 유형의 사전 처리 된 소변 표본을 사용하여 동결이 최대 5 번까지 해동되면 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
