Human Aquaporin 2 Elisa Kit

소개
Aquaporin 2 (AQP2)는 약 300 개의 아미노산으로 구성된 비교적 작은 막 단백질이며 신장 수집 덕트에서 소변 농도에 관여하며 물 분자 만 통과하고 신체의 물을 제어하는 책임이있는 수로입니다. 신체가 탈수되면, 바소프레신은 AQP2가 세포 내에서 세포 표면으로 이동하여 원래 소변에서 물만 재 흡수하고 소변을 집중시킨다.
키트 기능
- 이것은 재조합 인간 아쿠아 포린 2를 사용하여 생산 된 항체를 사용한 효소 면역 분석 (ELISA 방법)입니다.
- 소변의 Aquaporin 2 (AQP2)는 구체적이고 정확하게 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
- ※이 키트는 연구 시약이며 질병을 진단하거나 지원하는 데 사용할 수 없습니다.
키트 구성
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- 1필수 장비, 장비 등
- 1섹시 실린더
- 2크기 피펫
- 3마이크로 피펫 및 팁
- 4플레이트 셰이커
- 5플레이트 와셔
- 6인큐베이터
- 7종이 타월
- 8플레이트 리더 (바카라 루쥬 파장 : 450nm)
- 9마이크로 미터 튜브 등 (용량 1.5ml 이상의 밀봉 가능한 용기)
- 2시약 준비 및 저장 방법
- 1청소 솔루션
정제 된 물을 총 세척 용액 (40 mL)의 비율로 혼합하여 준비를 제조한다. 결정이 청소 스톡 용액에 침전 된 경우, 가열 한 후 용해 후 준비하십시오. - 2표준 솔루션
20 μl의 표준 용액 (600 ng/ml)을 380 μl의 1 차 반응 완충제로 20 회 희석하여 30.0 ng/mL 표준 용액을 형성합니다. 30.0ng/mL 표준 용액을 일련의 희석하여 15.0ng/ml, 7.50ng/ml, 1.88ng/ml, 0.94ng/ml 및 0.47ng/ml의 농도로 표준 용액을 준비하십시오.표 1 : 표준 솔루션의 희석 방법 - 3항-인간 아쿠아 포린 2 안티 티어 룸 희석제 (201 배 희석제)
필요한 양을 제조하기 위해 12 mL의 2 차 및 3 차 반응 완충제에서 항-인간 아쿠아 포린 2 항혈청 스톡 용액을 혼합합니다. 두 번째 반응 직전에 준비하십시오. - 4효소-표지 된 항-토끼 IgG 희석제 (201 배 희석)
필요한 양을 제조하기 위해 12 mL의 2 차 및 3 차 반응 완충제에서 효소-표지 된 항-토끼 IgG 스톡 용액을 혼합한다. 세 번째 반응 직전에 준비하십시오. - 5기판 용액
기판 용액 B를 6 mL의 기판 용액 A에서 혼합하여 필요한 양을 준비합니다. 색상 개발 반응 직전에 준비하고 즉시 사용하십시오.
- ※바카라 루쥬을위한 소변 표본은 전처리되어야합니다. 전처리 지침은 명령어 매뉴얼을 참조하십시오.
- 1청소 솔루션
- 3바카라 루쥬 방법
1. 민감도 테스트
0ng/ml에서 표준 용액의 흡광도는 0.100 미만입니다.
0.47ng/ml의 표준 용액의 흡광도 0ng/ml의 흡광도는 0.030 이상을 나타냅니다.
30.0ng/ml의 표준 용액의 흡광도 0ng/ml의 흡광도는 1.000 이상을 나타냅니다.
2. 정확도 테스트
세 가지 유형의 제어 된 시편에 대한 바카라 루쥬은 알려진 농도의 ± 30% 이내의 값을 나타냅니다.
3. 동시 재현성 테스트
이중 바카라 루쥬으로 세 가지 유형의 제어 시편이 동시에 4 회 바카라 루쥬되면 바카라 루쥬 된 값의 변동 계수는 20%미만입니다.
4. 바카라 루쥬 범위
우리 시설에서 바카라 루쥬 샘플로 사전 처리 된 소변 표본을 사용한 시험의 결과로, 인간 아쿠아 포린 2의 바카라 루쥬 범위는 0.27-30.0 ng/ml로 설정되었다 (사전 치료 전 소변 표본의 바카라 루쥬 범위는 0.35-39.0 ng/ml, 1.3 번의 상관 없음).
이 키트는 제조 일로부터 18 개월 동안 유효합니다. 만료 날짜는 키트의 외부 상자에 표시됩니다.
4 개의 할부로 사용할 수 있습니다. 나머지 구성 시약을 2-8 ° C에서 밀봉 된 상태에 보관하십시오.
다른 일련 번호와 키트 구성 시약의 조합을 사용하지 마십시오. 키트의 일련 번호가 동일한 경우에도 다른 포장 시약과 항체 플레이트의 조합을 사용하지 마십시오.
사용하기 전에 각 구성 시약을 20-30 ° C로 반환하십시오.
4 가지 유형의 제어 샘플의 농도는 동결 된 표준 생성물의 표준 곡선으로부터 계산되었으며, 결과적으로 표준 제품의 동결 및 해동의 최대 7 회 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
플레이트의 웰에 바카라 루쥬 샘플을 삽입 할 때 발생하는 시간 지연의 효과가 확인되었습니다. 동일한 플레이트에서 샘플링에 필요한 시간이 0, 15 또는 30 분인 경우 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
모든 세척 작업이 수동으로 수행 된 경우 플레이트 세탁기와 바카라 루쥬이 영향을받지 않았습니다.
- [청소 절차]
- 1플레이트에서 액체를 쫓아 낸 후 종이 타월에 빠르게 분쇄되어 잔류 액체를 완전히 흡수하고 제거합니다.
- 2300 μl의 세척 용액을 각 웰에 넣습니다.
- 3디캔트 및 폐기.
- 4
- 5플레이트에서 액체를 쫓아 낸 후 종이 타월에 빠르게 분쇄되어 잔류 액체를 완전히 흡수하고 제거합니다.
샘플링의 표준 절차는 100 μL의 1 차 반응 완충제를 각 웰에 미리 첨가 한 다음 각각의 웰에 각각의 농도에서 50 μL의 표준 용액 및 시편을 추가하는 것입니다. 잘못된 절차를 수행함으로써 먼저 각 웰에 각각의 농도의 표준 용액 및 표본을 먼저 추가 한 다음 각 웰에 100 μL의 1 차 반응 완충제를 추가 한 다음 절차의 효과를 확인한 후 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
우리는 세 가지 유형의 관리 샘플을 사용하여 흔들리는 속도 (Shaking Machine Labinco LD-45)의 효과를 조사했으며, 결과적으로 흡광도의 변동은 회전 속도 의존적 방식으로 확인되었습니다. 그러나 아래 다이어그램에서 볼 수 있듯이 거의 동일한 바카라 루쥬 값은 400 ~ 800 rpm 사이에서 얻을 수 있으므로 흔들리는 속도는 400 내지 800 rpm에서 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
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Delfia Plate Shaker를 사용할 때 : 1296-004 (제조업체 이름 : Perkinelmer),
600 rpm 및 낮음 (약 920 rpm)이 Labinco의 흔들리는 기계 600 rpm과 거의 동일한 바카라 루쥬을 생성 할 수 있음을 확인했습니다. (사내 데이터) Deifia Plate Shaker (1296-004)를 사용할 때 회전 속도를 600 rpm 또는 스케일 낮음 (약 920 rpm)으로 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
마이크로 믹서 진탕 기계 : MX-4 (제조업체 이름 : Sanko Junyaku)를 사용할 때
670 rpm과 2.5 (약 990 rpm)의 회전 속도 스케일에서 Labinco 쉐이킹 머신 600 rpm과 거의 동일한 바카라 루쥬을 얻을 수 있음을 확인했습니다. (사내 데이터) 마이크로 믹서 셰이커 (MX-4)를 사용할 때 회전 속도를 670 rpm 또는 스케일 2.5 (약 990 rpm)로 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
반응 온도의 효과는 세 가지 유형의 제어 된 샘플을 사용하여 검사하였고, 흡광도에서의 반응 온도-의존적 변동이 확인되었다. 그러나 바카라 루쥬 값은 대략 20 ° C와 30 ° C 사이에서 얻을 수 있으므로 20 ° C ~ 30 ° C에서 반응해야합니다.
우리는 세 가지 유형의 제어 된 샘플을 사용하여 반응 시간의 효과를 조사했으며, 110 분에서 130 분 사이에 거의 동일한 바카라 루쥬이 얻어졌습니다.
카테랄 반응은 밤새있을 수 있습니다. 하룻밤 사이에 4 ° C에서 17 시간 동안 두십시오.
우리는 3 가지 유형의 관리 샘플을 사용한 항-인간 아쿠아 포린 2 항-표지 항-랩 비트 IgG 항체의 희석 인자의 효과를 조사하였고, 흡광도에서의 희석 인자-의존적 변이가 확인되었지만 거의 동일한 바카라 루쥬은 168-234-fold 희석액 사이에 얻어졌다.
각각의 실질적인 흡수를 계산하기 위해 각 농도에서 표준 용액 및 시편의 표준 용액 0ng/ml의 평균 흡수 (빈 값)의 표준 용액을 빼냅니다. X 축에 대한 표준 용액의 농도와 Y 축에 대한 상당한 흡수성을 플로팅하십시오.
0.27 ~ 30.00ng/ml에서 인간 아쿠아 포린 2를 바카라 루쥬 할 수 있습니다 (전처리 전 소변 표본의 바카라 루쥬 범위는 0.35 ~ 39.0ng/ml, 부피 교정의 1.3 배). 우리 시설에서 바카라 루쥬 샘플로서 전처리 된 소변 시편을 사용한 시험 결과는 검출 한계가 0.17ng/ml이고 정량화 한계는 0.27ng/ml임을 보여 주었다.
3 가지 유형의 제어 된 샘플 (H, M, L)을 동시에 4 회 바카라 루쥬했을 때 바카라 루쥬 일 재현성 테스트가 수행되었고, 상호 바카라 루쥬 된 재현성 테스트는 아래에 표시된 3 개의 상이한 바카라 루쥬 인사 및 상호 바카라 루쥬 된 재현성 검사에 의해 수행되었다.
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각 농도에서 3 가지 유형의 관리 샘플 (H, M, L) 및 동일한 양의 표준 용액이 혼합 된 샘플을 바카라 루쥬했습니다. 인간 아쿠아 포린 2의 바카라 루쥬을 결정하고 이론적 값에 기초하여 회복 속도를 평가 하였다.
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희석 조정 된 항-인간 아쿠아 포린 2 항혈청을 두 부분으로 나누고, 하나는 냉장되었고, 다른 하나는 25 ° C에서 저장되었고, 4 시간 후에 바카라 루쥬이 수행되었으며, 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
희석 조절 효소-표지 된 항-토끼 IgG 용액을 두 부분으로 나누고, 하나는 냉장되었고, 다른 하나는 25 ℃에서 저장되었고, 6 시간 후에 바카라 루쥬을 수행하고 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
제조 된 기판 용액을 두 부분으로 나누고, 하나는 냉장되었고, 다른 하나는 25 ° C에서 저장되었고, 바카라 루쥬은 3 시간 후에 수행되었으며 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
흡광도는 반응 정지 용액을 첨가 한 후 즉시 30 분, 1 시간 및 2 시간을 바카라 루쥬했으며, 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았다.
바카라 루쥬 가능한 표본은 인간 소변입니다. 소변 검사는 전처리 후 바카라 루쥬에 사용해야합니다.
소변 표본을 운반 할 때 냉장 보관하십시오. -20 ° C 이하에서 냉장 또는 보관하면 5 개의 소변 표본은 최대 9 개월의 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
3 가지 유형의 소변 표본이 얼어서 5 번까지 해동하여 전처리되면 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
사전 치료는 항상 소변 표본을 바카라 루쥬해야합니다.
전처리의 정적 시간을 검사 한 후 10 분에서 30 분 이내에 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다. 전처리의 정적 시간은 10 분에서 30 분 안에 바카라 루쥬 할 수 있습니다.
전처리 된 소변 표본에서 강수량을 샘플링하지 마십시오.
전처리 된 소변 표본이 세 가지 유형의 전처리 된 소변 표본을 사용하여 30 ° C에 저장 한 경우, 24 시간까지 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았으며, 냉장 된 경우 최대 7 일. 전처리 된 소변 표본의 두 가지 유형은 냉장 또는 -20 ° C 이하에 저장 될 때 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
우리는 3 가지 유형의 관리 샘플, 사전 처리 된 소변 표본의 안정성을 조사하고 냉장 및 7 일까지 30 ° C에서 냉장 및 저장 한 상태에서 30 ° C에 저장할 때 바카라 루쥬 값이 감소하여 8 ° C 또는 아래에서 저장하지 않음을 발견했습니다.
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밑줄 : 뛰어난
3 가지 유형의 사전 처리 된 소변 표본을 사용하여 동결이 최대 5 번까지 해동되면 바카라 루쥬에 영향을 미치지 않았습니다.
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